ЭКСПРЕССИЯ СD31 В ПЛЕОМОРФНОМ ВАРИАНТЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ФИБРОЗНОЙ ГИСТИОЦИТОМЫ МЯГКИХ ТКАНЕЙ

клеток, препятствует формированию иммунного ответа на опухоль [9]. VEGF стимулирует активность эндотелиальных клеток, их миграцию и пролиферацию. Самый чувствительный маркер последних ― CD31, известный также под названием PECAM-1 (Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1) [10, 11].

Учитывая изложенное, целью нашего исследования было сравнительное изучение сочетания экспрессии CD31 с другими прогностическими факторами при плеоморфном (фибробластическом) варианте ЗФГ мягких тканей.

матЕРИал И мЕтоДы ИССлЕДоВанИЯ

В соответствии с целью исследования в эту работу включены данные о 41 (100%) больном с плеоморфным вариантом ЗФГ мягких тканей, находившихся на лечении в Городском онкологическом диспансере им. А.Т. Аббасова (Баку) и Онкологической клинике Азербайджанского медицинского университета в период с 2000 по 2009 год. У всех пациентов

Рисунок. Плеоморфный вариант ЗФГ мягких тканей; ИГХ препарат с высокой степенью позитивности СD31

Плотность позитивных клеток в индивидуальных материалах была достаточно изменчива и находилась в связи со степенью гистологической диф-

ференциации, наличием и выраженностью спонтан-

Злокачественные опухоли мягких тканей составляют 0,2–2,6% всех злокачественных опухолей человека, поражают практически одинаково часто мужчин и женщин, чаще в возрасте 20–50 лет. До настоящего времени не раскрыты этиология и патогенез этих опухолей, мало изучены географические особенности их распространения, остаются нерешенными вопросы диагностики (в том числе дифференциальной), прогнозирования течения заболевания, выбора метода лечения. Одной из форм опухолей мягких тканей (согласно гистологической классификации ВОЗ) является злокачественная фиброзная гистиоцитома (ЗФГ). Выделяют следующие ее гистологические разновидности: плеоморфную ― 50–60%, миксоидную (миксоматозную) ― 25%, гигантоклеточную ― 10%, воспалительную ― 5%. Что касается ангиоматозной (ангиомотоидной) разновидности, встречающейся исключительно у детей и имеющей благоприятный прогноз, то одни авторы относят этот тип опухолей к ЗФГ, другие рассматривают его как доброкачественную опухоль ― ангиоматоидную фиброзную гистиоцитому [1, 2].

Как указывалось, плеоморфный вариант ― одна из наиболее часто встречающихся разновидностей ЗФГ. Такие опухоли характеризуются диффузным скоплением беспорядочно расположенных клеток двух типов: веретенообразных клеток с признаками фибробластов и кубических эпителиоидных клеток, напоминающих гистиоциты. Для второй разновидности характерно наличие атипичных гигантских клеток, многоядерных, делящихся, с причудливыми (в том числе триполярными) фигурами митозов. Помимо множественных гиперхромных ядер эти клетки могут содержать в цитоплазме маленькие капли жира, придающие им пенистый вид. Строма опухоли обычно не выражена, заменена опухолевым компонентом. Однако при тщательном исследовании обнаруживаются расположенные между клетками нежные коллагеновые волокна, а также различное количество му-

цина. В ткани опухоли могут встречаться лимфоциты, плазматические клетки, эозинофилы, нейтрофилы, которые скапливаются вокруг кровеносных сосудов. ЗФГ характеризуются диффузным распространением, глубоким прорастанием в дерму, подкожную жировую клетчатку, фасции и другие мягкотканные элементы, а также опухолевым некрозом; ЗФГ могут распространяться по межфасциальным пространствам, нервам и кровеносным сосудам [3, 4].

Хотя плеоморфный вариант ЗФГ охарактеризован как самостоятельная разновидность таких опухолей сравнительно недавно [5], на современном этапе диагностика и выбор лечебной тактики при этих опухолях основываются не только на верификации гистологической разновидности и степени дифференциации, но и на оценке прогноза течения заболевания. К факторам прогноза ЗФГ относят размеры опухоли, ее расположение, гистологическую разновидность (наиболее благоприятный прогноз при миксоидной разновидности ЗФГ), степень дифференциации (злокачественности), распространенность некроза и степень воспаления в опухоли, глубину прорастания, вовлечение фасций или рост вдоль фасциальных пространств, наличие рецидивов и метастазов. В настоящее время активно исследуют процессы неоангиогенеза в ЗФГ как для уточнения прогноза заболевания, так и для оптимизации лечебной тактики [1, 6].

Ключевую мишень при лечении ряда опухолевых заболеваний представляет собой фактор роста эндотелия сосудов (Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF). Хотя в ангиогенезе в различных тканях (в том числе ив опухолях) участвует много ростовых факторов, VEGF является самым мощным и доминирующим медиатором этого процесса [6–8]. Связываясь с мембранными тирозин-киназными рецепторами клеток, VEGF влияет на развитие новых кровеносных сосудов (ангиогенез), выживание незрелых кровеносных сосудов (сосудистая поддержка); подавляя созревание дендритных

диагноз был верифицирован на основании морфологического исследования биопсийного и операционного материала; дополнительно применяли иммуногистохимическое (ИГХ) исследование.

Для ИГХ исследования (которое, как известно, применяется как важный метод диагностики и прогноза опухолей различных локализаций и имеет преимущественно высокую точность и возможность получения объективной и обширной прогностической информации) применяли материал, замороженный в жидком азоте, из которого изготавливали криостатные срезы с последующей фиксацией в ацетоне, а также материал парафиновых блоков, фиксированных в 10% формалине. Все этапы ИГХ исследования проводили по общепринятым методикам, используя реактивы, моноклональные антитела, системы визуализации фирмы «Дако». В частности, использовали МкАТ CD31 (Endothеlial Cell, 0,2/1ml, «Дако»).

Готовые препараты микроскопировали и фото-

графировали в одинаковых условиях, используя светооптические микроскопы «Аmplival» и «NU-2E» (Германия). Определяли плотность позитивноокрашенных клеток (количество соответствующих клеток на 1 мм2 среза ткани). Согласно полученным абсолютным цифровым данным, установлены следующие уровни показателя экспрессии CD31: 1,0 у.е. ― «низкий»; 2,0 у.е. ― «средний»; 3,0 у.е. ―

«высокий»; 4,0 у. е. ― «очень высокий» [12].

РЕзУлЬтаты И Их обСУЖДЕнИЕ

Показано, что при ИГХ исследовании плеоморфного варианта ЗФГ экспрессию CD31 выявляли во всех материалах, наблюдая преимущественно ее высокий уровень (3,0–4,0 у.е.) (рисунок). Маркер CD31 экспрессирует эндотелиоциты, а также периваскулярные (адвентициальные) элементы сосудов. Среди эндотелиоцитов выраженная экспрессия СD31 (3,0–4,0 у.е.) идентифицирована в 50% клеток, положительная реакция (1,0– 2,0 у.е.) ― в 36%, постоянная негативность ― в 14% .

ного некроза, уровнем лимфоидной инфильтрации опухоли, а также количеством сосудов в ней.

При сопоставлении степени гистологической дифференциации плеоморфного варианта ЗФГ мягких тканей с наличием СD31 нами были получены следующие данные: выявляется обратная связь между уровнем экспрессии рецептора СD31 и степенью гистодифференциации. То есть чем выше гистодифференциация опухоли, тем меньше количество СD31-высокопозитивного материала (табл. 1).

Таблица 1 Связь между экспрессией СD31 и гистологической дифферен-

циацией при плеоморфном варианте ЗФГ

* (количество материалов с соответствующим уровнем экспрессии CD31 / количество больных с соответствующей градацией анализируемого признака) × 100% (в табл. 1–4).

Обратная связь установлена и между экспрессией стромальными элементами СD31 и спонтанной некротизацией опухолевой ткани. Чем больше размеры очагов спонтанной некротизации опухоли, тем меньше количество CD31-позитивных материалов (табл. 2).

Таблица 2 Связь между экспрессией СD31 и спонтанной некротизацией

опухоли при плеоморфном варианте ЗФГ

Следует подчеркнуть, что наличие и размер очагов некроза является важным прогностическим критерием после радикального хирургического лечения больных с ЗФГ мягких тканей.

При изучении связи между лимфоидной инфильтрацией патологического очага и экспрессией СD31 также обнаружена обратная зависимость исследованных показателей (табл. 3).

Таблица 3 Связь между экспрессией СD31 и уровнем лимфоидной инфильтрации опухоли при плеоморфном варианте ЗФГ

Для изучения ангиогенеза нами также был произведен подсчет количества сосудов в каждом из опухолевых образцов. Установлено, что среднее количество сосудов на срезах при плеоморфном варианте ЗФГ мягких тканей на 1 мм2 среза составляет 12,4 ± 1,7; выделены следующие условные градации количества сосудов: высокое ― (> (M + m)), среднее ― (M ± m), низкое ― (< (M – m)). Обнаружена прямая связь между экспрессией СD31 и интенсивностью васкуляризации опухолевой ткани. Другими словами, уровень экспрессии CD31 повышался в образцах с интенсивной васкуляризацией (табл. 4).

Таблица 4 Связь между экспрессией СD31 и количеством сосудов при

больных,

высокий,

3 у.е.

2 у.е.

1 у.е.

плеоморфном варианте ЗФГ

Таким образом, установлена четкая зависимость (прямая или обратная) уровня экспрессии СD31 в опухолевой ткани с такими известными прогностическими характеристиками плеоморфной разновидности ЗФГ, как степень гистологической дифференциации, уровень спонтанной некротизации, лимфоидной инфильтрации и васкуляризации опухолевой ткани. Описанные нами ИГХ особенности относительно экспрессии СD31 при плеоморфном варианте ЗФГ следует принимать во внимание при планировании лечебных мероприятий у больных с

3. Обнаружена прямая зависимость между васкуляризацией опухолевой ткани и уровнем экспрессии СD31 в плеоморфной разновидности ЗФГ.

лИтЕРатУРа

1. Al-Agha OM, Igbokwe AA. Malignant fibrous histiocyto- ma: between the past and the present. Arch Pathol Lab Med 2008; 132 (6): 1030–5.

2. World Health Organization Classification of Tumors: Pa- thology and Genetics of Tumors of Soft Tissue and Bone. / Ed: CD Fletcher, F Mertens / Lyon France: IARC Press, 2002. 203 р.

3. AJCC Cancer Staging Handbook. New York: Springer-Ver- lag, 2002. 336 р

4. Soft Tissue Tumors. / Ed: SW Weiss, GJ Enzinger / St Lou- is: Mosby, 2001.

5. Fletcher CD. Pleomorphic malignant fibrous histiocytoma: fact or fiction? A critical reappraisal based on 159 tumors diagnosed as pleomorphic sarcoma. Am J Surg Pathol 1992; 16 (3): 213–28.

6. Bergers G, Benjamin LE. Tumour genesis and the angio- genesisic switch. Nat Rev Cancer 2003; 3: 401–10.

7. McMahon G. VEGF receptor signaling in tumour angio- genesis. Oncologist 2000; 5 (Suppl 11): 3–10.

8. Paleoloq EM. Angiogenesis in rheumatoid arthritis. Arthr Res 2002; 4 (Suppl 3): 81–90.

9. Gabnovich DI, Ishida T, Oyama T, et al. Vascular endothe- lial growth factor inhibits the development of dentritie cells and dramatically affects the differentiation of multiple haematopoiet- ic lineages in vivo. Blood 1998; 92: 4150–66.

10. Delisser HM, et al. Involement of endothelial PECAM – 1/ CD31 in angiogenesis. Am J Pathol 1997; 151: 671–7.

11. De Young BR, Wick MR, Pitzgibbon JF, et al. CD31: an immunospecific marker for endothelial differentiation in human neoplasms. Appl Immunohistochem 1993; 1: 97–100.

12. Лойд З, Госсрау Р, Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М: Мир, 1982. 272 с.

данной онкологической патологией.

ВыВоДы

1. Чем выше степень гистологической дифференциации плеоморфной разновидности ЗФГ, тем ниже уровень экспрессии СD31.

2. При плеоморфном варианте ЗФГ выявлена обратная зависимость между экспрессией СD31 эндотелиальными клетками, с одной стороны, и наличием и выраженностью спонтанной некротизации опухолевой ткани, а также ее лимфоидной инфильтрации, с другой.