ФАРМАКОКИНЕТИКА ФЛУОРОУРАЦИЛА В ОПУХОЛЕВОЙ И НОРМАЛЬНОЙ ТКАНИ ПАЦИЕНТОВ С АДЕНОКАРЦИНОМОЙ ЖЕЛУДКА

Зинкович И.И.

Проведено сравнительное изучение фармакокинетики флуороурацила (ФУ) в опухолевой и нормальной (не трансформированной) ткани стенки желудка 16 пациентов с аденокарциномой желудка. Через 2–60 мин после внутриартериального введения ФУ были отобраны образцы опухолей и нормальных тканей, в которых определяли концентрацию ФУ и активность дигидропиримидиндегидрогеназы (ДПДГ). Установлено, что в опухолевой ткани концентрация ФУ экспоненциально уменьшается с увеличением времени после его введения (R = -0,74 при р = 0,01). Отмечена умеренная корреляция активности ДПДГ с концентрацией ФУ (R = -0,62 при p = 0,06), а также со временем после его введения (R = 0,59 при p = 0,07). В то же время в смежной нормальной ткани все вышеперечисленные связи отсутствуют. Таким образом, в опухолевой ткани разных пациентов отмечено отсутствие индивидуальных особенностей катаболизма ФУ, что не характерно для нормальных, смежных тканей.


ВВЕДЕНИЕ

Цитостатик флуороурацил (ФУ) уже свыше 40 лет остается наиболее часто применяемым препаратом в лечении больных раком органов желудочно-кишечного тракта [1, 2]. Собственно 5-ФУ является предшественником активных метаболитов (5-фторуридин, 5-фтор-УМФ, 5-фтор-УДФ, 5-фтор-УТФ), которые и обеспечивают его противоопухолевое действие. Почками и печенью выводится 10–20% ФУ в неизменном виде, а до 80% введенного в организм ФУ катаболизирует фермент распада пиримидинов — дигидропиримидиндегидрогеназа (ДПДГ) [3, 4]. Максимальная активность этого фермента отмечается в печени и лимфоцитах [4, 5]. В ряде исследований было показано наличие свя-

зи между активностью ДПДГ и чувствительностью

опухолевых тканей к ФУ, а также системной токсичностью препарата [6, 7]. У 3–5% населения генетически детерминирована низкая активность этого фермента, что обусловливает возможность развития тяжелых побочных эффектов при введении ФУ [3]. С другой стороны, имеются данные, что для пациентов с высокой активностью ДПДГ терапия 5-ФУ, вероятно, будет неэффективной [6, 8].С прогностической целью активность ДПДГ обычно определяют в мононуклеарных клетках периферической крови. Предполагают, что активность фермента в мононуклеарных клетках периферической крови прямо коррелирует с его активностью в печени [5, 9]. Результаты некоторых исследований дают основания полагать, что такой подход эффективен для оценки риска развития проявлений токсичности препарата, но не позволяет предсказать чувствительность к

нему опухолевых клеток, определяющим фактором которой является активность ДПДГ непосредственно в опухоли [9, 10].

Целью исследования было сравнение показателей фармакокинетики ФУ в опухолевой ткани желудка и в смежной с опухолью нормальной, непораженной стенке желудка.

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом для исследования служили образцы опухоли и смежных с ней тканей (без видимых признаков опухолевого поражения или воспаления), изъятые во время операции у 16 больных (9 мужчин и 7 женщин в возрасте от 43 до 74 лет) раком желудка на разных стадиях заболевания (ТII–TIV). Исследование было одобрено Комитетом по этике Донецкого национального медицинского университета им. М. Горького.

Препарат ФУ вводили всем пациентам в дозе 250 мг струйно в желудочно-сальниковую артерию за 2–60 мин до удаления опухоли. Образцы опухолей и смежной ткани массой 2–5 г хранили при -20° С. Для приготовления экстракта образцы гомогенизировали на холоде в фосфатном буфере (рН = 7,4) в соотношении масса образца/буфер 1:20 и центрифугировали при 3000 об/мин.

Для определения концентрации ФУ использовали модифицированную нами методику N. Christophidis [11], состоящую в двойной экстракции ФУ и дальнейшем измерении концентрации препарата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). К 1 мл гомогената тканей добавляли 10 мл этилацетата, интенсивно встряхивали в тече-

ние 90 с, затем центрифугировали 3 мин при 3000 об/ мин и отбирали верхний органический слой в пробирку с 1 мл щелочного буфера (0,6 мМ Na2HPO4 доводили до рН = 11,0 0,1 М раствором NaOH). Содержимое пробирок снова интенсивно перемешивали и центрифугировали, как описано выше. Верхний ор-

ганический слой удаляли и добавляли к водной фазе 10 мкл 1 М серной кислоты для нейтрализации среды. Анализ полученных образцов проводили на хроматографе Shimadzu (Япония) с УФ-детектором на обратнофазовой колонке Ascentis С-18LC длиной 10 см. В качестве элюента использовали ацетатный буфер (рН = 4,5). При скорости потока 0,1 мл/мин время выхода ФУ составляло 5,2 мин. Площадь пиков определяли автоматически в программе Shimadzu Liquid Solution. Для расчета концентрации ФУ использовали калибровочный график (коэффициент корреляции R = 0,99 при р = 0,05), построенный по 5 различным концентрациям вещества (10–300 мкмоль/л) по-

сле вышеописанной подготовки проб.

Принцип метода определения активности ДПДГ состоит в оценке изменения оптической плотности при длине волны поглощения субстрата этого фермента — НАДФН — при добавлении к раствору последнего гомогената тканей. В кварцевую кювету толщиной 0,5 см помещали 0,25 мл 1 мМ НАДФН, 0,25 мл раствора, содержащего MgCl2 (8 мМ) и ФУ

(1 мМ), и 0,41 мл фосфатного буфера (рН = 7,4) с

ных с ними, неизмененных тканях стенки желудка (R = 0,02 при р = 0,94).

image

image

меркаптоэтанолом (1 мкМ). Содержимое кюветы нагревали до 40°С, после чего добавляли 0,05 мл гомогената и сразу проводили измерения на УФ-

0

-20

95% confidence

спектрометре Specord-200 при длине волны 340 нм в течение 240 с с интервалом в 2 с. Расчет активности проводили по углу наклона линии тренда графика изменения оптической плотности НАДФН с учетом концентрации белка в гомогенате, которую измеряли по методу Лоури [12].

Обработку цифрового материала проводили в статистическом пакете Statistica 6.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В опухоли желудка концентрация ФУ экспоненциально уменьшается с увеличением времени после его введения (рис. 1 а). Коэффициент корреляции для такой экспоненциальной зависимости составляет -0,74 при р = 0,01. Максимальная концентрация препарата была отмечена в опухоли пациента, которому ФУ ввели за 2 мин до иссечения ткани, — 41,4 мкмоль/г ткани, а минимальная — 0,33 мкмоль/г ткани при иссечении через 60 мин после введения препарата. Для нормальных, смежных с опухолевым узлом, тканей стенки желудка подобной зависимости не наблюдали (рис. 1 б). Концентрация ФУ в таких образцах не зависела от времени после его введения (коэффициент корреляции R = 0,1 при р = 0,76).

Более того, корреляционный анализ не выявил

статистически значимой связи между показателями концентрации цитостатика в опухолях и в смеж-

Рис. 1. Динамика концентрации ФУ в опухолевой (а) и нормальной (б) тканях стенки желудка с течением времени после введения препарата

Как и предполагалось, в опухолевой ткани наблюдали умеренную обратную корреляцию активности ДПДГ с концентрацией ФУ (R = -0,62 при р = 0,06), то есть уровень препарата пропорционально ниже у пациентов с высокой активностью ДПДГ (рис. 2 а). В смежной ткани статистически значимая связь между этими показателями отсутствует (R = -0,30 при р = 0,46) (рис. 2 б).

image

Изменения протеиназ-ингибиторной системы у больных раком желудка
  • ОТДАЛЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ КОМБИНИРОВАННОГО ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С МЕСТНОРАСПРОСТРАНЕННЫМ РАКОМ ДИСТАЛЬНОГО ОТДЕЛА ЖЕЛУДКА
  • ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМБИНИРОВАННОГО ЛЕЧЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ НЕОАДЪЮВАНТНОЙ ДИСТАНЦИОННОЙ ГАММА-ТЕРАПИИ ПРИ РАКЕ ДИСТАЛЬНОГО ОТДЕЛА ЖЕЛУДКА
  • УРОВЕНЬ ФАКТОРА РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА

  • Без комментариев » Добавить комментарий